Análisis cuantitativo de interacciones moleculares proteína-proteína mediante la combinación de microarreglos y un lector óptico basado en el fenómeno de resonancia de plasmones superficiales

Abstract

La resonancia de plasmones superficiales (SPR) encuentra una aplicación directa como sensor óptico en la lectura de interacciones biomoleculares. En este trabajo empleamos un microscopio de resonancia de plasmones superficiales para la lectura simultánea y en tiempo real de interacciones proteína-proteína mediante su combinación con microarreglos. La detección de dichos eventos moleculares se hacen sin necesidad de marcado fluorescente de la molécula bajo estudio. Los microarreglos fabricados contienen 144 elementos microscópicos activos de proteínas de (1) albumina de suero de humano HSA (0.1, 05, 1.0 mg/ml), (2) lisozima Lyz (0.1, 05, 1.0 mg/ml), (3) anti albúmina de suero de bovino anti BSA (1.0 mg/ml) y (4) albúmina de suero de bovino BSA (0.1, 05, 1.0 mg/ml). Determinamos simultáneamente las densidades de concentración superficial de interacción de anti albumina de suero de bovino a 1.0 mg/ml inyectada sobre los micrositios de proteínas previamente descritos, a través de las curvas de cinética de interacción SPR. Encontramos que para concentraciones altas (1.0 mg/ml) de los micrositios impresos interactuando con solución conteniendo anti BSA (1.0 mg/ml), la densidad de concentración superficial de anti BSA anclada fue de 660 ng/cm$^{2}$ para BSA, 366 ng/cm$^{2}$ en el caso de HSA, 22.3 ng/cm$^{2 }$ en Lyz y de 8.3 ng/cm$^{2 }$ para anti BSA.